Б.Ф. Вачаев, Э.А. Яговкин, Г.Г. Онищенко, Н.В. Медуницын, А.П. Шепелев,
Т.В. Белик, И.Л. Юрьева, С.В. Головина, В.В. Алешня, Г.Ф. Лазикова, Р.П. Чупрынина,
Т.И. Немировская, Н.И. Храмова, Т.М. Каргина, Р.А. Волкова, М.Э. Яговкин., Г.В. Хмелевская, И.С. Королева.
СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ ОТЕЧЕСТВЕННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ.
Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии, Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича, г. Москва, Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Министерства здравоохранения и со-циального развития РФ, г. Москва, Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии, г.Москва.
Исследованиями, проведенными в ряде регионов России показано, что инфекция, вызываемая Haemophilus influenzae, актуальна для нашей страны.
Во многих странах мира проблема Hib инфекции решена введением в календарь прививок специфической вакцинации детей с двухмесячного возраста. В России вакцины против Hib инфекции не разработано. В рамках реализации ФЦП «Предупреждение и борьба с заболеваниями социального характера», подпрограмма «Вакцинопрофилактика» развернуты работы по созданию отечественной промышленной технологии получения гемофильной вакцины.
В ходе выполнения программы разработаны два варианта вакцины: гемофильная тип «b» химическая сухая; гемофильная тип «b» конъюгированная сухая. Всестороннее изучение вакцин в лабораторных условиях показало их малую реактогенность, безопасность и антигенную активность, на основании чего Министерство здравоохранения РФ разрешило проведение клинических испытаний двух вариантов вакцин на ограниченной группе взрослых добровольцев.
В данном сообщении представлены материалы по изучению реактогенности, безопасности и антигенной активности гемофильных вакцин при проведении клинических испытаний на ограниченной группе взрослых добровольцев.
Материалы и методы.
Клинические испытания проводились в соответствии с международными требованиями, отраженными в стандарте отрасли «Правила проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации», утвержденным Министерством здравоохранения РФ.
В испытаниях приняли участие 55 человек в возрасте от 18 до 40 лет, сформированных в 3 группы.
Группа I – прививались экспериментальной вакциной гемофильной тип «b» химической сухой – 19 чел.
Группа II–прививались экспериментальной вакциной гемофильной тип «b» конъюгированной сухой – 17 чел.
Группа III- прививались коммерческой вакциной АКТ-ХИБ (Авентис Пастер Франция) – 19 чел.
Коммерческая вакцина АКТ-ХИБ хорошо зарекомендовала себя в длительных эпидемиологических испытаниях, зарегистрирована в России и служила препаратом сравнения.
У испытуемых до и после вакцинации изучались: местные проявления вакцинации, состояние жизненно важных органов и систем организма (сердечно-сосудистой, нервной системы, печени, почек, крови, иммунной системы).
Результаты и обсуждение.
По результатам проведенных исследований все используемые вакцины вызывали у испытуемых слабую температурную реакцию. В среднем температура повышалась в первые 2 суток у 1–3 испытуемых на 0,1-0,5° и не превышала пределов 37°-37,3°, возвращаясь к исходной через 1-2 дня. Состояние сердечно-сосудистой системы, по данным ЭКГ, было без изменения по сравнению с состоянием до вакцинации.
При обработке данных, связанных с регистрацией местных реакций, анализировали частоту наличия покраснения и инфильтрата. Кроме местных проявлений в области инъекции учитывалась болезненность, припухлость, наличие абсцессов. Учитывалось увеличение лимфатических узлов.
По характеру местных проявлений экспериментальные вакцины были равнозначными. У прививаемых отмечалась быстропроходящая болезненность в месте введения. При вакцинации АКТ-ХИБ вакциной также отмечалась быстропроходящая болезненность в месте введения, но по сравнению с I и II группой у вакцинированных III группы отмечалась более выраженная реакция со стороны региональных лимфоузлов без признаков выраженного воспаления, что расценивалось нами как результат более интенсивного воздействия вакцины на иммунную систему.
Иммунизация экспериментальными и коммерческой вакцинами не оказывала значимого влияния на гематологические показатели. При вакцинации тремя вакцинами отмечалось некоторое увеличение числа лимфоцитов, моноцитов и незначительное снижение палочкоядерных нейтрофилов по сравнению с фоном, но эти изменения не выходили за пределы физиологической нормы.
Биохимические параметры, характеризующие функции почек, печени, сердца и других жизненно важных органов и являющиеся важными показателями вакцинального процесса, не выявили отклонений от физиологических норм показателей, которые свидетельствовали бы о токсических воздействиях испытуемых вакцин.
Учитывая, что при вакцинации могут иметь место связанные с изменением иммунореактивности вакцинированного побочные иммунологические эффекты, свидетельствующие о нарушении иммунного гомеостаза, изучались показатели, характеризующие состояние Т- и В- клеточного звеньев иммунитета до и после вакцинации.
Как свидетельствуют результаты, представленные в таблице 1, отмечена стимуляция Т-клеточного звена иммунной системы при вакцинации как
Таблица 1
Состояние Т-клеточного звена иммунного статуса добровольцев при иммунизации гемофильными вакцинами.
Изучаемые параметры |
Показатели нормы |
Группа I Вакцинация ХИБ-вакциной химической (экспериментальная) |
Группа II Вакцинация ХИБ-вакциной конъюгированной (экспериментальная) |
Группа III Вакцинация АКТ-ХИБ вакциной (коммерческая) |
|||
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
||
Т-клетки (маркер CD 3) (10 9 /л абсол. кол-во, % |
60-80% |
1315,8±289,2 63,6±3,68 |
* 1589±420,7 71,1±4,71 |
1110±338,56 64,2±8,64 |
* 1706,4±304,33 64,2±8,64 |
1186,3±357,43 66,5±2,79 |
* 1673,7±309,71 72,8±4,25 |
Т-хеллеры (маркер CD 4) абсол. кол-во, % |
36-54% |
821,6±189,4 39,7±3,48 |
* 1050,7±299,2 46,9±4,54 |
794,8±179,5 46,2±4,89 |
* 1174,7±172,9 49,7±5,05 |
760,4±219,7 43,4±4,32 |
* 1089,5±254,8 47,1±3,78 |
Т-супрессоры (маркеры CD 8) абсол.кол-во, % |
19-27% |
487,5±104,59 23,6±2,14 |
533,1±142,83 23,9±2,44 |
399,4±131,31 23,1±3,64 |
577,1±156,94 23,8±3,64 |
435,2±158,7 24,0±2,82 |
584,6±140,0 25,5±3,4 |
Соотношение CD 4/ CD 8 |
1,5-2,5 |
1,71±0,25 |
* 2,01±0,35 |
2,09±0,47 |
* 2,17±0,44 |
1,87±0,41 |
* 1,92±0,36 |
Т-киллеры (маркер CD 16) абсол. кол-во, % |
9-16% |
268,2±78,20 13,1±3,28 |
353,5±143,2 15,4±3,47 |
187,9±87,5 10,9±3,43 |
* 396,0±111,46 16,5±3,97 |
210,2±85,95 11,9±3,16 |
* 419,5±113,77 18,3±3,64 |
Примечание: * - статистически значимые различия до и после вакцинации (Р < 0,05).
экспериментальными, так и коммерческой вакциной сравнения по общему содержанию Т-клеток, Т-хелперов, соотношению Т-хелперов/Т-супрессоров. При этом не отмечалось значимых повышений Т-супрессорных клеток. Отмечалось также повышение количества Т-киллерных лимфоцитов при иммунизации тремя вакцинами. Регистрируемые уровни повышения количества Т-клеток не выходили за рамки физиологической нормы.
Показатели, характеризующие В-клеточное звено, представленные в таблице 2 свидетельствовали о том, что в группах I и II привитых экспери-ментальными вакцинами, отмечалось незначительное статистически значимое увеличение В- лимфоцитов. У привитых коммерческой вакциной увеличения количества В-клеток не отмечалось. По нашему мнению, это может быть связано с особенностями иммуногенеза препаратов, конъюгированных разными методическими приемами.
У добровольцев, вакцинированных экспериментальными и коммерческой вакцинами, отмечалось равнозначное увеличение иммуноглобулинов классов А, G, М. Уровень общего иммуноглобулина Е, являющегося одним из показателей аллергизации организма, не повышался.
По результатам образования циркулирующих иммунных комплексов, представленных в таблице № 3, отмечено незначительное повышение их уровня после вакцинации по сравнению с уровнем до вакцинации, практически соответствующее показателям физиологической нормы.
Подводя итог результатам изучения иммунологической безопасности вакцин, можно сделать вывод, что вакцинация экспериментальными и коммерческой вакцинами приводит к адекватной реакции иммунной системы без отрицательного воздействия на клеточные и гуморальные системы иммунитета, которые могли бы привести к срыву физиологической нормы.
Антигенные свойства вакцин по содержанию специфических к PRP антител в сыворотках крови добровольцев через 20 дней после введения сравниваемых препаратов, определяли, используя ИФА тестсистему фирмы Фулекс (США).
Таблица 2
Состояние В-клеточного звена иммунного статуса добровольцев при иммунизации гемофильными вакцинами
Изучаемые параметры |
Показатели нормы |
Группа I Вакцинация ХИБ-вакциной химической (экспериментальная) |
Группа II Вакцинация ХИБ-вакциной конъюгированной (экспериментальная) |
Группа III Вакцинация АКТ-ХИБ вакциной (коммерческая) |
|||
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
||
В-клетки (маркер CD 20) |
296,6±92,17 |
* 432,6±124,6 |
248,9±93,9 |
* 450,5±120,12 |
301,2±165,3 |
386,1±117,2 |
|
Абсол. кол-во, % |
10-23% |
14,3±3,56 |
* 19,5±3,15 |
14,4±3,63 |
* 18,8±3,60 |
15,9±4,60 |
16,6±3,50 |
Примечание: * Статистически значимые различия до и после вакцинации.
Таблица 3.
Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)
у добровольцев при иммунизации гемофильными вакцинами.
Наименование препаратов |
Содержание ЦИК (у.е.) |
|
До вакцинации M± m |
После вакцинации M± m |
|
1. Вакцина Hib экспериментальная ( I группа). Уровень прироста |
87,3±21,5 |
107±23,9 +19,7 |
2. Вакцина Hib экспериментальная ( II группа). Уровень прироста |
88,7±14,63 |
94,6±14,10 +5,9 |
3. Вакцина Hib коммерческая ( III группа). Уровень прироста. |
92,5±24,5 |
112,2±25,7 +19,7 |
Показатель нормы |
30-100 у.е. |
Оценку антителопродукции осуществляли в соответствии с международными критериями: уровень антител к PRP < 0,15 мкг/мл считался как незащитный, уровень і 0,15 мкг/мл как условно-защитный: уровень і 1 как показатель стойкой защиты. Результаты представленные на рис. 1, свидетельствовали, что экспериментальная конъюгированная вакцина по уровню сероконверсии была равнозначна коммерческой АКТ-ХИБ-вакцине: 93,8 % и 100 % сывороток соответственно имели уровень антител к PRP і 1 мкг/мл. Данный уровень соответствует требованию ВОЗ к гемофильным вакцинам. Экспериментальная химическая вакцина была менее эффективной, обеспечивая в 68,4 % уровень антител стойкой защиты.
При характеристике титров антител к PRP наибольшая эффективность наблюдалась при вакцинации коммерческой АКТ-ХИБ вакциной (от 7,0 до 17 мкг/мл). Меньший, но достаточно высокий титр наблюдался у привитых экспериментальной конъюгированной вакциной (от 4,6 до 13 мкг/мл).
Нельзя не отметить, что у части добровольцев до вакцинации отмечался достаточно высокий уровень антител к Hib, что свидетельствует о распространенности циркуляции возбудителя, возможно создающей достаточную иммунную прослойку у взрослых к этой инфекции.
В ходе выполнения исследований параллельно разрабатывались иммунобиологические препараты для лабораторной диагностики Hib инфекции: завершены государственные испытания и рекомендованы для практического применения стимулятор роста для гемофильных микробов; разработаны диагностические системы для выявления антигена и антител с использованием метода ИФА и латексагглютинации, в том числе с использованием моноклональных антител.
Выводы:
1. По результатам ограниченных клинических испытаний на взрослых добровольцах экспериментальные отечественные гемофильные вакцины могут быть признаны как слабореактогенные и безопасные.
2. Предпочтение следует отдать экспериментальной конъюгированной гем-фильной вакцине.
3. Следующий этап должен включать испытания вакцины на детском контингенте.
Контактное лицо:
Яговкин Эдуард Александрович,
344010, г. Ростов-на-Дону, пер. Газетный 119.
тел. (863)234-91-84
РЕЗЮМЕ
Представлены материалы проведения клинических испытаний на ограниченной группе взрослых добровольцев от 18 до 40 лет двух вариантов экспериментальных отечественных вакцин: гемофильной тип «b» химической сухой и гемофильной тип «b» конъюгированной сухой. Препаратом сравнения служила коммерческая вакцина АКТ-ХИБ (Авентис Пастер, Франция), хорошо зарекомендовавшая себя в длительных эпидемиологических испытаниях и зарегистрированная в России.
По результатам испытаний экспериментальные отечественные вакцины признаны слабореактогенными и безопасными. Предпочтение отдано экспериментальной конъюгированной вакцине.